عاجل
الرئيسية » 🔬موسوعة التحاليل الطبية » Bacterology » صبغه الزهل نلسن ziehl neelsen stain

صبغه الزهل نلسن ziehl neelsen stain

بسم الله الرحمن الرحيم

موضوع اليوم سيكون عن

صبغه الزهل نلسن (ziehl neelsen stain )

او المقاومه للحمض Acid Fast bacilli

وهى من الصبغات المركبه التي تحتوي على ثلاث مكونات تصبغ البكتيريا المقاومه للحمض باللون الاحمر وتصبغ المنطقه المحيطه بالبكتيريا(back ground ) والمتضمن كل مايحيط بالبكتيريا من خلايا او بكتيريا غير مقاومه للحمض تصبغ باللون الازرق او الاخضر بحسب الصبغه البديله المستخدمه (ازرق او اخضر )

استخدامات الصبغه:-

تسخدم هذه الصبغه للتفريق بين البكتيريا المقاومه للحمض مثل (Mycobacterium tuberculosis) و (Mycobacterium lepry ) الاصباغ العاديه لا تستطيع اختراق الطبقه الشمعيه المحيطه بجرثومه السل لذا يستخدم محلول من الكاربول فوكسين (carbol fuchsin) والذي يحتوي على5% من الفينول الذي له القدره الذوبان في الدهون مع اللهب يستطيع اختراق الطبقه الشمعيه للبكتيريا السل التى تستطيع الاحتفاظ بهذه الصبغه بعد معاملتها بمزيل لون قوي هو اسيد الكحول (Acid alcohol) بينما باقي انواع البكتيريا لا تستطيع الاحتفاظ بها وتاخذ لون الصبغه الثانويه اما ازرق عند استخدام (Methylene blue ) او اخضر عند استخدام ( Malachite green)

🔷مبدا عمل الصبغه:-

تستخدم هذه الصبغه للبكتيريا الذي جدارها الخلوى يحتوي سلاسل طويله من الدهون الشحميه waxy التي تعرف ب (Mycolic acid ) (Acid Fast Bacilli) وتعتبر بكتيريا السل هي اكثر بكتيريا شائعه كمقاومه للحمض ( Mycobacterium tuberculosis) لانها تحتوي على هذه الطبقه السميكه فانه حتي تدخل الصبغه الاوليه الكربول فوكسين نحتاج الى تسخين هذه الصبغه التسخين الى ان ينتج بخار بشرط عدم حدوث غليان التسخين يؤدي الى تمدود في جدار الخليه البكتيريه مما يسمح لصبغه الكاربول فوكسين بالدخول الى دخل الخليه البكتيريه فيذوب الفينول في الدهون وتصبغ البكتيريا بالون الاحمر بعد ذلك نترك الشريحه المصبوغه لمده ٥ دقائق لكي يسمح لجدار الخليه بالرجوع الى حالته الطبيعيه وبذلك عند اضافه مزيل اللون لن يستطيع عبور جدار الخليه البكتيريه لازله الصبغه وبذالك سميت هذه البكتيريا بالبكتيريا المقاومه للحمض.

🔷تحضير لطخه من البلغم المحتوي علي السل اللصبغ

١-اتخذ الاحتياطات الازمه ( قفازات وكمامه ونظارات ).

٢- جهز شريحه زجاجيه جديده باستخدام القلم الماسي عنون الشريحه.

٣- سخن الواير لوب الى ان يخمر وبعد ذلك اترك الواير حتى يبرد خذ كميه مناسبه من البلغم المحتوي على قيح ودم وافردها بدائره قطرها ٢-٣ سم بشكل متساوي الفرد يكون من المستحسن داخل كابنه امان.

٤-تترك الشريحه تجف وتثبت اذا كان قسم الاحياء الدقيقه فيع كابنه امان يمكن ان تثبت باللهب واذا لم يكن يحتوي على كابنه امان فمن المستحسن ان نثبت بالميثانول لمده دقيقتين.

٥-بعد التثبيت اصبحت الشريحه جاهزه للصبغ.


وهناك تقنيتان لصبغ بكتيريا السل

🔶الاولى 👇

1-hot ziehl-neelsen stain technique.

الذي تتم باستخدام الحراره والتي سوف نقوم بالتكلم عنها اليوم وتعتبر الاكثر استخداما ودقه.

🔶التقنيه الثانيه

2-Cold Ziehl – Neelsen stain technique

ولا يحدث تسخين اثناء الصبغ انما يستخدم محلول مركز من الكربول فاكسين

🔷طريقه الصبغ

بعد تثبيت عينه البلغم نبدا عمليه الصبغ. نرتب الصبغات بنفس التسلسل الخاص بالصبغ

١- كاربول فوكسين( الصبغه الاوليه او الاساسيه ) ( carbol fuchsin )

٢- اسيد الكحول( مزيل اللون ) ( HCl 3% in 95% ethanol)

٣- الميثلين الازرق ( الصبغه البديله) (Methylene blue )

🔶قبل ان نبدا الصبغ يجب ان نتاكد من ان الصبغه موثوقه ؟

ارجع الى موضوع ضبط الجوده للصبغات.

١- تغمر الشريحه المحضره من البلغم بالكاربول فوكسين ونقوم بعمل لهب تحت الصبغه درجه حاره ٦٠ ° مئويه من ان اجل تسخين (بدون غليان فقط تسخين)الصبغه الى ان يتصاعد البخار من الشريحه المحتويه على صبغه الكربول فوكسين لماذا؟؟؟؟؟؟؟؟؟

بعد تصاعد البخار تترك الشريحه لمده ٥ دقائق بعد عمليه التسخين لماذا ؟؟؟؟؟؟؟

ملاحظه مهمه :-

يجب الا تجف الصبغه خلال عمليه التسخين لمنع ذلك تاكد من ان الشريحه مغموره تماما بمحلول الكاربول فاكسين ولا تصل درجه الحراره الى درجه الغليان .

٢-تغسل الشريحه بالماء بعد ذلك تغمر الشريحه اسيد الكحول بمزيل اللون ) لمده ٥ دقائق وانظر حتي يختفى اللون الاحمر اذا لم يختفي اضيف مره اخرى اسيد الكحول الى ان يختفي اللون الاحمر وبعد ذلك يغسل بالماء.

٣- تغمر الشريحه بميثلين بلو تترك لمده دقيقتين وتغسل بالماء الماء وتترك لتجف.

٤- بعد ان تجف الشريحه نضع قطره من الزيت على الشريحه وتفحص بالعدسه ١٠٠x


Acid fast bacilli لاحظ لون عصيات السل اخذت اللون الاحمر الخاص بصبغة الكاربول فوكسين وبقيه الخلفيه اخذت اللون الازرق الخاص المثلين الازرق


النتيجه بعد الصبغ

1 – تظهر البكتيريا المقاومه للحمض ⬅️ عصيات مستقيمه او منحنيه قليل قد تكون مفرده او في مجموعات او محبب

2- الخلايا قيحيه او طلائيه ⬅️ تصبغ باللون الازرق

3- بقيه الخلفيه للشريحه ⬅️ ايضا تصبغ باللون الازرق

التقرير

عندما نجد العصيات المقاومه للحمض يكون التقرير

( AFB positive )

وبعد ذلك نعطي تقدير لعدد البكتيريا الموجوده

اكثر من ١٠ عصيات لكل حقل ⬅️يكون التقرير

(AFB positive +++ )

. اذا كان عدد العصيات ما بين ١-١٠ عصيات لكل حقل ⬅️يكون التقرير

(AFB positive ++ )

اذا كان عدد العصيات مابين ١٠- ١٠٠ لكل ١٠٠ حقل ⬅️يكون التقرير

( + AFB positive )

اذا كان عدد العصيات مابين ١-٩ لكل ١٠٠ حقل يكون التقرير ⬅️ عدد العصيات مثلا طلع ٩ عصيات في ١٠٠ حقل يكون التقرير

( AFB positive 9 )

واذا طلع في ١٠٠ حقل فقط عصيه او ثنتين في هذه الحاله تطلب عينه اخرى.

تسجل النتيجه انه لا يوجد عصيات بشرط ان تكون بحثت في ١٠٠ حقل ولا توجد اي عصيه هنا نسجل للتقرير

( NO AFB seen )

⬅️ لا نكتب بالتقرير negative ❌لماذا

يعتبر خطاء يمكن ان تكون موجوده لاصابه لكن لاتوجد في تلك الحقول الذي تم دراستها لذلك انت تكتب انك لم ترى اي عصيه في الحقول الذي قمت بدراستها.


AFB +ve +++


AFB +ve ++


ضبط الجوده :-

دائما لاتعتمد اي صبغه جديده الا بعد التحقق منها او اي صبغه مخزنه ولها فتره لم تقم باستخدامها في هذه الحاله من المفترض ان تحضر شريحتين معروف انها تحتوي على عصيات تي بي احدهما تكون عدد العصيات كثيره والاخرى تحتوى على عدد قليل تفحص الشريحتين ونتحقق من النتيجه ونعدم الصبغه اذا طلع الشرائح المصبوغه بها عضيات دل ذلك على كفاءه الصبغه.

حول: هلال سود
تعليقات ( 92 )
دخول

تسجيل

نحن نأسف فالتسجيل مغلق حاليا , تواصل بالإدارة للقيام بهذه الوضيفة